Vitamin D(비타민D) 2종(비타민D2, 비타민D3) LC-MS/MS

제8. 2.2.2.7 비타민D 가. 액체크로마토그래프(육방전환밸브시스템)/자외부검출기 또는 액체크로마토그래프/질량분석기에 의한 정량

컬럼: [LC-MS/MS] C18(2.1 × 100 mm, 1.7 µm) 또는 이와 동등한 것 / [LC/UV 육방전환밸브] 전처리칼럼 Capcellpak MF C8 SG 80(4.6 mm × 150 mm, 5 μm), 농축칼럼 Capcellpak C18 UG 120V(2.0 mm × 35 mm, 5 μm), 분석칼럼 Cadenza CD-C18(1.5 mm × 250 mm, 3 μm) 또는 각각 이와 동등한 것
이동상: [LC-MS/MS] 5 mM 초산암모늄/메탄올(5/95) 등용매 / [LC/UV] 전처리칼럼 이동상 80%(v/v) 메탄올, 분석칼럼 이동상 96%(v/v) 메탄올
유속: [LC-MS/MS] 0.45 mL/min / [LC/UV] 전처리칼럼 300 μL/min, 분석칼럼 90 μL/min
검출: [LC-MS/MS] 질량분석기(MRM) / [LC/UV] 자외부(UV) 검출기 264 nm
주입량: [LC-MS/MS] 1 μL / [LC/UV] 100 μL
컬럼온도: [LC-MS/MS] 40℃ / [LC/UV] 원문 미명시
이온화: ESI positive (Source temperature 120℃, Collision gas N2(질소 또는 비활성기체), Capillary voltage 3.5 kV)
MS 조건: 비타민D2: 397 → 107, 105, 91 / 비타민D3: 385 → 107, 105, 79 (Precursor ion → Fragment ion, m/z)
대상 화합물: 2종 동시분석

시험법 적용범위: 조제식류, 조제유류 등에 적용한다. 한 조문 안에 ① 액체크로마토그래프(육방전환밸브시스템)/자외부검출기(LC/UV)와 ② 액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS) 두 측정조건이 대등하게 규정되어 있어 두 조건을 모두 병기했다(technique은 LC-MS/MS 기준). 육방전환밸브는 전처리칼럼에서 비타민D 피크 용출시간을 확인해 농축을 위한 전환 조작시간을 설정한다. 전처리: 비타민D 2 IU(0.05 μg) 이상 함유 검체를 물 3 mL로 녹이고 피로갈롤·에탄올(1→10) 40 mL, 수산화칼륨(9→10) 10 mL를 가해 끓는 물 중탕 30분 비누화, 헥산 50 mL씩 3회 추출, 1 N·0.5 N 수산화칼륨용액 및 물로 세척(페놀프탈레인 알칼리 반응 소실까지) 후 무수황산나트륨 탈수, 40℃ 이하 감압농축하고 메탄올 5 mL로 녹여 PTFE 0.45 μm 막 여과지로 여과. 표준원액은 비타민D2·D3 각 100 mg/메탄올 100 mL(1,000 μg/mL). 비타민D 함량은 D2와 D3를 구분하여 계산한 뒤 합한 값으로 하며, 비타민D 1 μg = 40 IU. 정량한계 원문 미명시.

출처: 식품공전 · 식약처 고시 제2026-1호 (시행 2026.1.13. 반영) · 원문 보기

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