공전·공정시험법 DB › 건강기능식품공전
비타민 B1(제2법) HPLC-UV/PDA/FL
건강기능식품의 기준 및 규격 제4. 3-6 비타민 B1 / 3-6-2 비타민 B1(제2법)
- 컬럼
- 옥타데실실릴화한 칼럼(안지름 4.6 mm, 길이 250 mm, 충전제 Octadecylsilica) 또는 이와 동등한 것
- 이동상
- 0.1 M 제1인산나트륨 수용액 — 등용매. 포스트칼럼 반응액: 0.01% 페리시안화칼륨·15%(w/v) 수산화나트륨용액 (유속 0.7 mL/분)
- 유속
- 0.7 mL/분 (반응액도 0.7 mL/분)
- 검출
- 형광검출기(FLD) 여기파장 375 nm, 측정파장 450 nm (페리시안 산화로 티오크롬 전환 후 검출)
- 주입량
- 10 μL
- 컬럼온도
- 40℃
제1법은 퍼무티트 칼럼관 정제 후 페리시안 또는 브롬시안 산화·이소부탄올 추출·형광광도계 측정하는 비크로마토 티오크롬법이며, 본 제2법이 HPLC-FLD법이다. 반응액은 컬럼 통과 후 이동상 Line과 T자관으로 연결하고 반응코일(0.8 mm I.D × 1 m)을 컬럼오븐에 장치하며, 반응액 역류 방지를 위해 반응액 펌프에 0.25 mm I.D 코일을 5~10 m 설치한다. 표준물질: Thiamine hydrochloride(Aneurine hydrochloride, C12H17ClN4OS·HCl, 분자량 337.27, CAS 67-03-8), 10% 삼염화초산용액에 100 μg/mL 원액 후 0.1~1.0 μg/mL로 희석하고 4 M 초산나트륨용액·2% 다카디아스타제용액과 20:3:1로 혼합. 전처리(일반시료): 시료 0.1~1 g(액상 5 g)에 10% 삼염화초산용액 5 mL로 2분 균질화 후 10 mL 정용 → 2,000×g 이상 30분 원심분리 → 상층액 1 mL를 100 mL 정용·희석 → 4 M 초산나트륨용액·2% 다카디아스타제용액과 20:3:1 혼합 → 1시간 초음파 추출 후 0.45 μm 여과. 계산 시 265.35(비타민 B1 분자량)/337.27(Thiamine hydrochloride 분자량) 환산. 정량한계는 원문 미명시.
출처: 건강기능식품공전 · 식약처고시 제2026-43호 (시행 2026.6.11. 시행) · 원문 보기
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