공전·공정시험법 DB › 사료공정(사료표준분석방법)
Amino acid(아미노산)(PITC 유도체화 PITC 유도체화법(역상크로마토그래피법)) HPLC-UV/PDA/FL
사료표준분석방법 3장. 아미노산(Amino acid) 3.1. 역상크로마토그래피법(PITC 유도체화법)
- 컬럼
- 고정상: C18 Column (칼럼 내경·길이·입자경은 원문 미명시)
- 이동상
- 이동상 A: 초산나트륨 20 g + TEA(트리에틸아민) 600 μL를 HPLC용 증류수로 녹여 1 L로 한 용액 940 mL에 아세토니트릴 60 mL를 혼합, 인산으로 pH 6.30～6.40 조정 후 0.45 μm 여과 / 이동상 B: 아세토니트릴 60 mL에 증류수를 채워 1 L (0.5 μm 지용성 여과지 여과). 기울기 용리(gradient, %A/%B/%C) — Initial 100/0/0 → 10.0분 54/46/0 → 10.5분 0/100/0 → 11.0분 0/100/0 → 14.0분 0/100/0 → 14.5분 100/0/0 → 20.5분 100/0/0 → 21.5분 100/0/0
- 유속
- 1.0～1.5 mL/min (원문 gradient 표에 시간대별 유속 명시: Initial～10.5분 1.0, 11.0～20.5분 1.5, 21.5분 1.0)
- 검출
- 자외부흡광검출기(UV), 파장 254 nm
- 주입량
- 원문 미명시 (유도체화 후 이동상 A로 희석하여 HPLC에 주입한다고만 기재)
- 컬럼온도
- 45～50℃
전처리: 시료 40～100 mg에 6 N 염산을 가해 질소 통기 후 105℃에서 24시간 가수분해 → No.6 여과지로 50 mL 정용 여과 → 0.45 μm 여과 → 일정량(50～100 μL) 진공건조 → 재건조시약[에탄올:증류수:TEA = 2:2:1] 16～20 μL로 재건조 → 유도체시약[에탄올:증류수:TEA:PITC = 7:1:1:1] 25 μL로 20～25분 반응 후 진공건조 → 이동상 A로 희석. 표준용액 최종농도 2～4 μmol/mL. 아미노산 프로필 다성분법이나 원문에 대상 아미노산 종수·목록은 미명시. 정량한계 원문 미명시.
출처: 사료공정(사료표준분석방법) · 농림축산식품부 공고 제2025-312호 (시행 2025.7.10. 공고 (사료표준분석방법 2025.6판)) · 원문 보기
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