Vitamin B12(비타민B12)(Cyanocobalamin(시아노코발라민)) LC-MS

제8. 2.2.2.11 비타민B12 가. 액체크로마토그래프(육방전환밸브시스템)/자외부검출기 또는 액체크로마토그래프/질량분석기에 의한 정량

컬럼: [LC-MS] ACQUITY UPLC® BEH(2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm) 또는 이와 동등한 것 / [LC/UV 육방전환밸브] 전처리컬럼 Capcellpak MF C8(4.6 mm × 150 mm, 5 μm), 농축컬럼 Capcellpak MG C18(2.0 mm × 35 mm, 5 μm), 분석컬럼 Capcellpak UG C18(1.5 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 각각 이와 동등한 것. 정제용 컬럼: 비타민B12용 면역친화성컬럼(회수율 및 재현성 등이 검증된 것)
이동상: [LC-MS] A: 20 mM 개미산암모늄, B: 아세토니트릴. 그라디언트(시간(분), A%, B%) — 0.0(95/5) → 0.7(95/5) → 1.2(80/20) → 1.6(80/20) → 1.7(20/80) → 3.7(20/80) → 3.8(95/5) → 6.0(95/5) / [LC/UV] 전처리컬럼 이동상 5 mM 인산이수소칼륨 용액, 분석컬럼 이동상 5 mM 인산이수소칼륨 용액/메탄올(80:20, v/v)
유속: [LC-MS] 0.4 mL/min / [LC/UV] 전처리컬럼 500 μL/min, 분석컬럼 120 μL/min
검출: [LC-MS] 질량분석기(MRM) / [LC/UV] 자외부검출기 550 nm
주입량: [LC-MS] 10 µL / [LC/UV] 400 μL
컬럼온도: [LC-MS] 35℃ / [LC/UV] 원문 미명시
이온화: ESI positive (Source temperature 120℃, Collision gas N2(질소 또는 비활성기체), Capillary voltage 3.5 kV)
MS 조건: 비타민B12: 678 → 147, 359 (Precursor ion → Fragment ion, m/z)

시험법 적용범위: 특수용도식품 등에 적용한다. 한 조문 안에 ① 액체크로마토그래프(육방전환밸브시스템)/자외부검출기와 ② 액체크로마토그래프/질량분석기 두 측정조건이 대등하게 규정되어 있어 두 조건을 모두 병기했다(technique은 LC-MS 기준). 전처리(추출): 균질화 검체 약 1～5 g에 0.2 M 초산나트륨 용액(pH 4) 49.5 mL와 1% 시안화나트륨 0.5 mL를 넣고 상온에서 10분 초음파 추출 후 100℃ 수욕에서 30분 추출, 냉각하여 Whatman No.2 등으로 여과. 전처리(정제): 면역친화성컬럼을 실온 30분 방치·완충용액 제거 후 증류수 3 mL로 활성화, 추출액 9 mL를 주입해 흡착시키고 증류수 3 mL씩 3회로 세척, 메탄올 3 mL로 용출하여 70℃ 질소 건고 후 증류수 0.5 mL로 녹인다. 표준원액은 시아노코발라민을 5 mM 인산이수소칼륨 용액에 녹여 100 μg/mL. 정량한계 원문 미명시.

출처: 식품공전 · 식약처 고시 제2026-1호 (시행 2026.1.13. 반영) · 원문 보기

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